文献类型： 中文期刊

作者： 王丽 ¹ ; 杜晓明 ¹ ; 王林林 ¹ ; 史西保 ¹ ; 藤蔓 ¹ ; 李功权 ¹ ; 权凯 ¹ ; 郭军庆 ¹ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室

关键词： 热休克蛋白;人热休克蛋白1;鼠热休克蛋白1;基因克隆;原核表达

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2011 年 26 卷 03 期

页码： 60-63

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 提取人肝癌SMMC-7721细胞和小鼠NS0细胞总RNA,对热休克蛋白10基因(Hsp10)进行RT-PCR扩增、TA克隆和测序。结果表明,从上述2种细胞中获得的cDNA分别由312,313 bp组成,与报道的人HSPE1 mRNA(NM-002157)、鼠肌肉Hspe1 mRNA(NM-008303)序列同源性分别为99%,97%,命名为HSPE1-1和Hspe1-1,序列分析表明,二者之间在核苷酸水平上的同源性为92%,氨基酸水平上的同源性为97%。将上述2种cDNA进行双酶切、亚克隆,成功构建了重组表达载体pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1,转化大肠杆菌并进行了诱导表达。检测结果表明,pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1均能在大肠杆菌中表达,表达蛋白分子量大小约为14 kDa,与预期大小一致。Western-Blot结果证实了其为目的蛋白,经镍树脂柱纯化,获得了相应的重组蛋白。为进一步研究这2种蛋白的结构、功能及临床应用奠定了基础。