文献类型: 中文期刊
作者: 陈洪举 1 ; 张浩 2 ; 高乐 3 ; 何鹏 3 ; 韦家少 3 ;
作者机构: 1.海南大学农学院中国热带农业科学院橡胶研究所
2.中国热带农业科学院南亚热带作物研究所
3.中国热带农业科学院橡胶研究所
关键词: 巴西橡胶树;地上部和地下部;酵母双杂交cDNA文库;均一化
期刊名称: 分子植物育种
ISSN: 1672-416X
年卷期: 2017 年 14 卷 02 期
页码: 468-473
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 缺磷是影响橡胶树产量的主要因素之一,蛋白泛素化在其中发挥了重要作用。为研究泛素化在橡胶树低磷胁迫中的调控作用,本研究分别以巴西橡胶树"热研7-33-97"组培苗地上部和地下部为材料,构建酵母双杂交文库,并对其进行了评价。首先用CTAB法大量提取橡胶树地上部和地下部总RNA,再用PROMEGA试剂盒处理获得纯化的m RNA,然后采用SMART誖技术和LD-PCR合成双链cDNA(ds-cDNA),继而通过双链特异性核酸酶(DSN)对ds-cDNA进行均一化处理,再经CHROMA SPIN+TE-400柱子纯化长片段的cDNA,最后将获得的长片段cDNA和线性化载体p GADT7-Rec共转化酵母Y187感受态细胞,构建均一化酵母双杂交文库。结果显示:地上部文库滴度8×107cfu/m L,插入片段≥0.5 kb的重组率为100%;地下部文库滴度7×107cfu/m L,插入片段≥0.5 kb的重组率为87%。该结果表明文库已成功构建,可以用于进一步实验。
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