文献类型： 中文期刊

作者： 刘田 ¹ ; 廖申权 ² ; 戚南山 ² ; 吴彩艳 ² ; 李娟 ² ; 吕敏娜 ² ; 李国清 ¹ ; 孙铭飞 ² ;

作者机构： 1.华南农业大学兽医学院

2.广东省农业科学院动物卫生研究所

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;葡萄糖-6-磷酸异构酶;克隆;原核表达

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2014 年 02 期

页码： 72-77

摘要： 为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,G6-PI)的生化特性,本研究对其基因进行了克隆和原核表达。根据NCBI已公布的E.tenella Houghton株G6-PI的基因序列(GI:298161921)设计特异性引物,运用RT-PCR方法扩增EtG6-PI基因序列,并将其克隆到表达载体pColdI、pCold43a中,构建重组质粒pColdIEtG6-PI、pCold43a-EtG6-PI,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞E.coli Rosetta(DE3),并进行IPTG诱导表达。结果表明,E.tenella G6-PI的ORF序列(1650 bp),编码550个氨基酸;重组菌pColdI-EtG6-PI、pCold43a-EtG6-PI均能成功诱导表达,其中pCold43a-EtG6-PI表达部分可溶性蛋白,表达产物纯化后可用于酶生化特性分析。柔嫩艾美耳球虫G6-PI基因的成功克隆表达为该酶的功能研究奠定了基础。