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牛干扰素-tau基因的原核表达及生物功能鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 高方方 1 ; 吴忠义 2 ; 曾申明 1 ;

作者机构： 1.中国农业大学动物科技学院

2.北京市农林科学院生物中心

关键词： 牛IFN-τ;克隆;原核表达;生物活性

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2008 年 16 卷 02 期

页码： 208-213

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用PCR方法直接从牛早期胚胎细胞中扩增牛干扰素-tau(bovine interferon-tau,bIFN-τ)基因,并克隆到pGEM-T载体中。然后将含信号肽和不含信号肽的bIFN-τ片段分别与原核表达载体pET-30a(+)连接,并用IPTG诱导表达。重组蛋白经Ni2+亲合层析纯化后,通过抗病毒检测和对靶细胞形态变化的影响检验其生物学功能。实验结果显示,以胚胎裂解液为模板、不提取胚胎基因组DNA,可以从少量(5枚)的牛囊胚中直接扩增出bIFN-!基因,与GenBank(XM-593584)序列相比,核苷酸和氨基酸的同源性分别为99%和97%;不含信号肽序列的重组质粒诱导表达后,经SDS-PAGE电泳检测发现约在20kD处出现特异性蛋白条带,与目标蛋白分子量一致;纯化后重组蛋白的抗病毒活性单位为1×104IU/mg;在牛子宫内膜上皮细胞培养液中添加2.9μg/mL纯化的rbIFN-!蛋白后24h,细胞体积明显增大,细胞内出现囊泡状结构。表明实验获得了具有一定生物活性的rbIFN-!蛋白。

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