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木薯钙调蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 欧文军 1 ; 余厚美 1 ; 安飞飞 1 ; 罗秀芹 1 ; 秦于玲 1 ; 陈松笔 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所

关键词： 木薯;钙调蛋白;原核表达;单克隆抗体

期刊名称： 西北农业学报

ISSN： 1004-1389

年卷期： 2017 年 26 卷 09 期

页码： 1317-1323

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 钙调蛋白(CaM)作为重要的抗逆信号转导蛋白,在调控木薯抗逆境和块根采后生理腐烂中起重要作用,为给快速检测木薯在不同生长环境中CaM蛋白的表达水平提供优良抗体,克隆木薯CaM基因并将目的基因插入原核表达载体,经Escherichia coli表达并纯化,用纯化的融合蛋白ACP-CaM免疫Balb/C小鼠,间接ELISA测定小鼠血清效价后,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选能产生抗CaM单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用Western blot、ELISA等方法对制备的单克隆抗体进行初步鉴定。Western blot分析结果显示原核表达重组质粒在E.coli中能高效表达CaM,免疫小鼠后取效价高的2#小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,共获得7株效价均达到106以上、能稳定分泌抗CaM抗体的细胞株,这7株单抗与淀粉磷酸化酶、His、BSA均无交叉反应,4D5株与标签蛋白ACP有交叉反应,表明其余6株均为CaM特异性抗体;抗体亚型鉴定结果显示7株单抗均为IgG型抗体。

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