文献类型： 中文期刊

作者： 廖申权 ¹ ; 吴彩艳 ¹ ; 戚南山 ¹ ; 李娟 ¹ ; 吕敏娜 ¹ ; 张健騑 ¹ ; 谢明权 ¹ ; 孙铭飞 ¹ ;

作者机构： 1.广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东省兽医公共卫生公共实验室

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶;克隆;原核表达;酶活性

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2015 年 46 卷 04 期

页码： 631-636

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在克隆柔嫩艾美耳球虫5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶(EtDXR)基因,初步分析EtDXR的酶活性。根据EuPathDB数据库信息注释、拼接Etdxr基因序列,设计特异性引物扩增Etdxr基因,构建原核表达质粒pCold I-EtDXR,转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE及Western blot分析,纯化rEtDXR,对rEtDXR进行酶活性分析,测定pH和Mg2+离子浓度对酶活性的影响。结果显示,Etdxr基因完整编码序列为1 746bp,氨基酸序列具有与其他物种高度保守的酶活性中心;成功构建原核表达质粒pCold I-EtDXR,SDS-PAGE以及Western blot分析显示,得到约50ku的蛋白质;利用直接检测底物NADPH消耗速率的方法分析EtDXR酶活性,结果显示,不同pH和离子浓度对EtDXR的酶活性有显著影响,其最佳的酶反应条件为pH 7.0,Mg2+离子浓度4.5mmol·L-1。本研究为进一步以EtDXR为药靶筛选抗球虫先导化合物奠定了基础。