文献类型： 中文期刊
作者： 李永清 1 ; 杨敬 2 ; 张莉 1 ; 韦莉 1 ;
作者机构： 1.北京市农林科学院畜牧兽医研究所
2.军事医学科学院实验动物中心
关键词： 禽流感病毒;M2蛋白;单克隆抗体
期刊名称： 细胞与分子免疫学杂志
ISSN： 1007-8738
年卷期： 2008 年 24 卷 05 期
页码： 475-478
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 目的:制备抗禽流感病毒M2蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:利用纯化的融合蛋白GST-M2免疫BALB/c小鼠,然后以GST-M2和GST分别作为ELISA抗原进行筛选,选择GST-M2抗原检测强阳性、GST抗原检测阴性的杂交瘤细胞进行克隆,建立能稳定分泌抗AIV M2 mAb的杂交瘤细胞株。mAb的效价采用间接ELISA和琼脂扩散试验(AGP)测定,用夹心ELISA测定Ig亚类,Western blot、抗原捕获ELISA、间接免疫荧光及免疫组化染色法检测mAb的特性。结果:得到4株分泌抗禽流感病毒M2蛋白的mAb的杂交瘤细胞株1E1、2F8、4E3和5D6,小鼠腹水中抗体的ELISA效价大于210×100、AGP效价大于1∶4。抗体亚类鉴定1E1和4E3为IgG2a,2F8和5G6为IgG2b。抗原捕获ELISA表明,2F8 mAb能与H5、H9亚型AIV发生特异性反应,而不能与鸡新城疫病毒(NDV)和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)反应。IFA和免疫组化试验表明,2F8 mAb能够与感染了禽流感病毒的MDCK细胞以及鸡体组织细胞发生特异性结合。结论:本研究获得4株抗禽流感病毒M2蛋白的mAb,其中2F8 mAb的效价高、特异性强,可作为检测AIV方法的核心试剂。
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