文献类型： 中文期刊

作者： 梁之瑄 ¹ ; 梅晨 ² ; 张雪 ¹ ; 徐浩钧 ² ; 支岩 ¹ ; 李焕荣 ¹ ; 王宏俊 ² ;

作者机构： 1.北京农学院动物科学技术学院

2.北京市农林科学院畜牧兽医研究所

关键词： 副鸡禽杆菌;lpxM蛋白;原核表达;免疫原性

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN：

年卷期： 2024 年 002 期

页码： 719-727

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】探究副鸡禽杆菌（Avibacterium paragallinarum）外膜蛋白lpxM的免疫原性，为预防鸡传染性鼻炎提供理论参考。【方法】构建pET-28a-lpxM原核表达载体，经PCR扩增和双酶切鉴定后将阳性质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，用IPTG进行诱导表达，并对诱导时间和诱导浓度进行优化，用尿素缓冲液纯化重组蛋白lpxM并进行SDS-PAGE分析。利用Western blotting鉴定重组蛋白的特异性。将重组蛋白与MONTANIDEISA 71 VG佐剂制备成疫苗v-lpxM,通过动物试验观察重组蛋白的免疫效果。【结果】重组质粒pET-28a-lpxM转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导后成功表达，在37 ku处有目的蛋白特异性条带，在37℃、700 mmol/L IPTG、诱导4 h时蛋白表达量最高；重组蛋白lpxM在上清和沉淀中均有表达，且在沉淀中表达量相对较高；Western blotting结果显示，C型副鸡禽杆菌Modesto株的阳性鸡血清与纯化后的重组蛋白可发生免疫反应。免疫保护试验结果显示，v-lpxM疫苗对A、B和C型副鸡禽杆菌的保护率分别为0、20%和60%。【结论】本研究成功构建了原核表达载体pET-28a-lpxM,实现了lpxM重组蛋白的高效表达，且表现出良好的免疫原性。研究结果为探究副鸡禽杆菌外膜蛋白lpxM的免疫学特性以及为鸡传染性鼻炎的预防和疫苗的研发奠定了基础。