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猪瘟病毒E0蛋白的高效表达及其间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 吴素丽 1 ; 孙惠玲 2 ; 钱永华 2 ;

作者机构： 1.西北农林科技大学

2.北京市农林科学院畜牧兽医研究所

关键词： 猪瘟病毒;E0;原核表达;间接ELISA

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2009 年 30 卷 08 期

页码： 13-18

收录情况： 北大核心

摘要： Trizol法提取猪瘟兔化弱毒株(C株)总RNA,根据GenBank中E0基因序列设计特异性引物,扩增克隆E0基因,插入原核表达载体pET-32a(+),转化进BL2l(DE3)内进行表达。将表达的重组pET-E0蛋白通过His亲和层析柱纯化,以纯化后的蛋白为诊断抗原,包被96孔聚乙烯平板,通过探索抗原包被量和血清稀释倍数,建立检测猪瘟E0抗体的ELISA方法。通过对蛋白表达条件和ELISA反应条件的优化,确定E0蛋白能在BL2l(DE3)内高效表达,表达量达30%,蛋白分子质量约为50 ku,且蛋白以可溶性形式存在。纯化后蛋白浓度为2 mg/mL;抗原最适包被量为300 ng;血清最适稀释度为1∶50。经阻断试验、交叉反应试验和与IDEXX公司猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合性(83%)试验证明,建立的E0-ELISA简便、特异、稳定,为研制开发E2标记疫苗的应用和推广提供配套的检测方法。

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