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番茄细菌性斑点病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 柴阿丽 1 ; 帕提古丽 1 ; 郭威涛 1 ; 石延霞 1 ; 谢学文 1 ; 席先梅 1 ; 李宝聚 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院蔬菜花卉研究所;新疆农业科学院园艺作物研究所;内蒙古农牧业科学院植物保护研究所

关键词： 番茄;丁香假单胞菌番茄致病变种;实时荧光定量PCR;种子检测;组织检测

期刊名称： 园艺学报

ISSN： 0513-353X

年卷期： 2019 年 01 期

页码： 182-192

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以番茄细菌性斑点病病原菌丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv. tomato,Pst)的致病相关基因HrpZ为靶序列,设计了特异性引物Pst3F/Pst3R,能从Pst基因组DNA中特异性扩增出大小为161 bp的目的片段。建立的Pst实时荧光定量PCR检测技术体系的检测灵敏度比普通PCR高1 000倍。利用实时荧光定量PCR检测体系,检测模拟带菌种子中Pst的带菌量,检测下限为4.21 cfu·g~(-1);检测人工接种叶片组织中Pst的带菌量,检测到1级发病叶片带菌量为4.15×102 cfu·g~(-1)。对田间采集的63个番茄细菌性斑点病明显症状和疑似症状样本,分别进行了实时荧光定量PCR、普通PCR和病原菌分离检测,检测到54个样本中含有Pst,3种方法检测结果一致。结果表明,建立的Pst实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测番茄种子和发病组织中Pst的含量,为番茄细菌性斑点病的早期预防和流行监测提供了有效的技术手段。

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