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构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D

文献类型： 中文期刊

作者： 费理文 1 ; 王勇 2 ;

作者机构： 1.上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

2.中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所

关键词： 甜菊糖苷;莱鲍迪苷D;尿苷二磷酸葡萄糖;蔗糖合酶;UDP-糖基转移酶;生物催化

期刊名称： 食品科学

ISSN： 1002-6630

年卷期： 2018 年 22 期

页码： 116-122

收录情况： EI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因,将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105,随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21(DE3)构建双酶共表达工程菌。在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)的条件下,以上述双酶共表达工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A(RA)获得的底物摩尔转化率大于80%,RD产量达到930 mg/L。随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21(DE3)工程菌。用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同。采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化,结果显示以粗酶催化可简化催化体系,并可将细胞催化体系所需高质量浓度蔗糖用量降至质量浓度5 g/100 mL,同时在不添加外源UDPG的条件下实现RD的高效生物催化,RA底物摩尔转化率达到93%,RD产量约为1 051 mg/L。

  • 相关文献

[1]一种作用于花青素和甜菊醇的甜菊糖基转移酶的基因克隆和功能分析(英文). 马凌波,张大兵,陈亮,陈睦传. 2003

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