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3种实蝇基因组DNA提取及ISSR-PCR反应体系的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 余德亿 1 ; 姚锦爱 1 ; 胡进锋 1 ; 黄鹏 2 ; 方大琳 2 ; 陈峰 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院植物保护研究所

2.福建省农作物害虫天敌资源工程技术研究中心

关键词： 实蝇;基因组DNA提取;ISSR-PCR反应体系;建立

期刊名称： 农学学报

ISSN： 1007-7774

年卷期： 2011 年 1 卷 05 期

页码： 22-28

摘要： 为探讨高品质实蝇基因组DNA提取,研究模板DNA浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、dNTP浓度、退火温度及时间对ISSR-PCR扩增结果的影响,以3种实蝇为材料,建立通用且稳定的实蝇ISSR-PCR反应体系。结果表明:获得了高品质实蝇基因组DNA;确立了通用且稳定的实蝇ISSR-PCR反应体系:10×PCRBuffer2.5μL,模板DNA50ng,引物0.25μmol/L,TaqDNA聚合酶0.50U,dNTP200μmol/L,最后加ddH2O至25μL;明确了ISSR-PCR扩增程序:94℃预变性5min,94℃变性30s,52.4℃退火45s,72℃延伸90s,循环36次,最后72℃延伸7min,4℃保存。体系的建立弥补了实蝇传统形态检测的不足,为快速准确鉴定、种群异质性及遗传多样性分析奠定了基础。

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