文献类型： 中文期刊

作者： 熊爱生 ¹ ; 姚泉洪 ² ; 彭日荷 ² ; 陈建民 ² ; 李贤 ² ; 范惠琴 ² ;

作者机构： 1.上海市农业遗传育种重点实验室

2.上海市农业遗传育种重点实验室,上海市农业科学院生物技术研究中心,上海市农业遗传育种重点实验室,上海市农业科学院生物技术研究中心,上海市农业遗传育种重点实验室,上海市农业科学院生物技术研究中心,扬州大学生物科学与技术学院,上海市农业遗传育种重点实验室,上海市农业科学院生物技术研究中心,上海市农业遗传育种重点实验室,上海市农业科学院生物技术研究中心 上海201106,上海201106,上海201106,扬州225009,上海201106,上海201106

关键词： β-葡萄糖苷酸酶;DNA改组;体外分子进化

期刊名称： 中国生物化学与分子生物学报

ISSN： 1007-7626

年卷期： 2003 年 19 卷 02 期

页码： 162-167

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： β 葡萄糖苷酸酶是在植物转基因中广泛应用的报告基因 .以质粒pBI12 1中的GUS基因为基础 ,利用DNA改组方法 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR对GUS基因进行了突变和改组 ,然后将改组的GUS基因连接到原核表达载体pG2 5 1中 ,构建了库容为 10 8的突变体库 .经过活性的筛选 ,得到活性提高的克隆 ,再以此为基础 ,经过新的改组、筛选得到活性大幅度提高的克隆GUS2 4 .基因测序显示 ,GUS2 4与GUS基因之间的同源性为 99 7% ,共有 6个核苷酸位点发生了改变 ,分别是 :379位的A突变为G ,396位的T突变为C ,711位的G突变为A ,95 8位T突变为C ,990位的T突变为C ,1649位的A突变为G .核苷酸序列推导的氨基酸序列显示 ,3个氨基酸发生了突变 ,12 7位的Ser突变为Gly ,32 0位的Trp突变为Arg ,5 5 0位的Asn突变为Ser.X gluc染色检测和荧光测活结果显示GUS2 4基因表达的 β 葡萄糖苷酸酶基较GUS基因表达产物活性提高 3倍