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胎羊与成年绵羊原代肝细胞的分离培养与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 邹东敏 1 ; 刘若楠 2 ; 李睿文 2 ; 刘茂军 3 ; 段智变 4 ; 马玉忠 2 ;

作者机构： 1.河北农业大学动物医学院

2.河北农业大学

3.江苏省农业科学院兽医研究所

4.山西农业大学动物科技学院

关键词： 绵羊;原代肝细胞;分离培养;鉴定

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2021 年 011 期

页码： 1462-1467

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了获得稳定、可持续传代的绵羊肝细胞,采集110～120 d的绵羊胚胎肝和正常未怀孕成年绵羊肝,用胶原酶两步灌流法分离肝细胞;用PAS染色法和CK-18免疫荧光法鉴定细胞;用CCK-8测定肝细胞第6、12、24、36、48、60、72和96小时的D450值,绘制生长曲线。结果显示,获得的绵羊原代肝细胞形态完整,贴壁良好,平均存活率为92%。PAS和CK-18荧光染色呈阳性,肝细胞纯度在95%以上。胎羊原代肝细胞可传代,成年绵羊肝细胞不可传代。由以上结果可知,将经典的Seglen两步原位胶原酶灌流法进行优化改良,可获得大量高纯度、高活性的绵羊原代肝细胞,胎羊肝细胞具有良好的活性,可满足需要大量肝细胞的体外试验研究。

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