文献类型： 中文期刊

作者： 钟纯燕 ¹ ; 主性 ¹ ; 李基棕 ¹ ; 毛立 ¹ ; 李文良 ¹ ; 郝飞 ¹ ; 刘茂军 ¹ ; 嵇辛勤 ¹ ; 肖芳 ¹ ;

作者机构： 1.贵州大学动物科学学院;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室

关键词： bta-miR-222;MDBK细胞;慢病毒

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2019 年 01 期

页码： 50-57

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 拟获取稳定表达bta-miR-222的MDBK细胞株,为后续探索bta-miR-222在MDBK细胞中的作用奠定基础。本研究使用PCR技术,从MDBK细胞基因组与pEGFP-N1质粒中扩增pri-bta-miR-222和GFP片段,胶回收,先克隆于pMD18-T载体中,转化入大肠杆菌,酶切鉴定及测序正确,再克隆于pCDH-CMVMCS-EF1-Puro载体,构建含bta-miR-222基因的miRNA慢病毒重组质粒pCDH-miR-222-GFP。将pCDHmiR-222-GFP与两个包装质粒PSP、PMD共转染293T细胞,制备含bta-miR-222基因的重组慢病毒V_(PCDH+miR-222)。用制备成功的慢病毒V_(PCDH+miR-222)感染MDBK细胞,经Puromycin嘌呤霉素筛选,荧光显微镜观察感染效率。结果显示,pCDH-miR-222-GFP过表达质粒构建成功,序列比对符合率达100%。将pCDH-miR-222-GFP、PSP和PMD共转染后,通过荧光显微镜观察到293T细胞分布大量的荧光,说明成功构建了重组慢病毒V_(PCDH+miR-222),经Puromycin嘌呤霉素筛选10代后,V_(PCDH+miR-222)在MDBK细胞中仍具有感染效率。本研究成功获取稳定表达bta-miR-222的MDBK细胞株,为进一步研究bta-miR-222在病毒感染MDBK细胞中的功能奠定了基础。