文献类型： 中文期刊

作者： 刘建汀 ¹ ; 朱海生 ¹ ; 温庆放 ¹ ; 王彬 ¹ ; 张前荣 ¹ ; 陈敏氡 ¹ ; 林珲 ¹ ; 薛珠政 ¹ ;

作者机构： 1.福建省蔬菜工程技术研究中心

关键词： 丝瓜;LcWRKY21;转录因子;基因克隆;表达分析

期刊名称： 中国细胞生物学学报

ISSN： 1674-7666

年卷期： 2017 年 39 卷 10 期

页码： 1268-1278

收录情况： CSCD

摘要： 采用RT-PCR和Race技术从普通丝瓜果肉中分离到1条长达1 809 bp的cDNA,并对其进行序列分析。结果表明,该序列包含1个1 044 bp的开放读码框(open reading frame,ORF);预测编码347个氨基酸,理论分子量为38.61 kDa,等电点为9.46;编码蛋白质与甜瓜(Cucumis melo)和黄瓜(Cucumis sativus)同源蛋白的相似性达到84%以上,具有高度的保守性,基因命名为LcWRKY21。Wolf Psort预测其亚细胞定位于细胞核(nucleus)内。Motif Scan分析显示,LcWRKY21蛋白质的氨基酸序列274~340位、279~339位和325~337位分别为WRKY保守结构域、DNA结合结构域及锌指结构域序列。同源性分析表明,丝瓜LcWRKY21的锌指结构为C2H2型,属于第II类WRKY蛋白质家族。荧光定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,q PCR)分析显示,LcWRKY21具有组织表达特异性,在普通丝瓜品种"福丝2号"果实中表达量最高,其次为根和茎,在叶片和花中的表达量较低。LcWRKY21基因在6个丝瓜品种中的表达水平具有品种差异性,在易褐变普通丝瓜品种"福丝2号"中的表达量最高,其次为普通丝瓜"福丝3号"和"福丝4号",在有棱丝瓜"福丝5号"、"福丝6号"和不易褐变的普通丝瓜品种"福丝1号"中的表达量较低。分析发现,LcWRKY21在"福丝2号"不同成熟时期中的表达量呈先上调后下调的趋势,在授粉后35 d的表达丰度达到最高。此外,LcWRKY21在普通丝瓜品种"福丝2号"的表达水平呈先上调后下调的趋势,鲜切后3 h时表达量达到最高,随后出现下调。初步推测,转录因子LcWRKY21基因在丝瓜果肉褐变过程中起着一定的调控作用。