文献类型： 中文期刊

作者： 陈晓艳 ¹ ; 孟亚雄 ¹ ; 贾小霞 ² ; 张武 ² ; 刘石 ² ; 郭玉美 ³ ; 齐恩芳 ¹ ;

作者机构： 1.甘肃农业大学

2.甘肃省农业科学院

3.甘肃农业职业技术学院

关键词： 马铃薯病毒;融合基因;载体构建;遗传转化;转基因烟草

期刊名称： 广西植物

ISSN： 1000-3142

年卷期： 2017 年 37 卷 01 期

页码： 87-95

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 该研究为了培育兼抗4种病毒的马铃薯品种,采用RT-PCR技术对PVX、PVS、PVY和PLRV的外壳蛋白(CP)基因进行克隆与分析,获得了大小分别为670、800、700、600 bp的CP基因序列,将获得的CP基因序列与NCBI中已报道的序列进行比对分析,其同源性都在96%以上。根据所克隆的CP基因对靶标片段进行筛选,获得了大小约300 bp的靶标片段PVX-rh、PVS-rh、PVY-rh和PLRV-rh,同时利用Overlap-PCR技术将4种病毒的靶标片段进行拼接,得到了长度约为1 200 bp的融合片段XSYV-rh,与预期目标片段XSYV-yxz的相似性达100%。利用DNA重组技术将融合片段XSYV-rh克隆到p GM-T载体上构建成克隆载体p GM-T-XSYVrh,用SpeⅠ和SacⅠ对克隆载体p GM-T-XSYV-rh和植物表达载体p ART27进行同步双酶切,用T4 DNA连接酶将XSYV-rh片段连接到载体p ART27上,成功构建了同时含4种病毒CP基因片段的植物表达载体p ART27-XSYV-rh。采用直接转化法将植物表达载体导入根癌农杆菌LBA4404中,并利用农杆菌介导法对烟草品种T12试管苗进行遗传转化,转化后的烟草植株经PCR检测,有40株转化植株可扩增出目的条带,表明XSYVrh融合基因已成功转入烟草基因组中。