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甘蓝型油菜丙酮酸激酶基因RNA 干扰载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 付三雄 1 ; 张超 1 ; 陈松 1 ; 周晓婴 1 ; 戚存扣 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院经济作物研究所

关键词： 甘蓝型油菜;丙酮酸激酶;RNA干扰;载体构建

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2013 年 29 卷 001 期

页码： 20-27

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用基因芯片技术,从油菜中鉴定了一个油分积累优势表达基因即丙酮酸激酶(Pyruvate kinase, PK)基因.为构建甘蓝型油菜PK 基因的RNA 干扰(RNAi)载体,通过设计引物克隆了PK 基因长498 bp 的siRNA 靶序列,连接到pEASY鄄T1 载体上,采用Not I 和Xho I 酶切,酶切产物连接到RNAi 平台载体pHurricane 的Not I 和Xho I 位点,通过多重PCR 鉴定证实载体构建成功,然后将上述PK 基因反向重复框克隆到加入napin 启动子的pCAMBIA1390 表达载体相应的酶切位点上,构建具有种子特异性表达的PK 基因的RNAi 载体.限制性内切酶酶切证实载体构建成功,为进一步研究PK 基因参与决定油菜油分积累的分子机理和代谢调控奠定了基础.

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[1]甘蓝型油菜丙酮酸激酶基因RNA干扰载体的构建(英文). 付三雄,张超,陈松,周晓婴,戚存扣. 2014

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