文献类型： 中文期刊

作者： 路斌 ¹ ; 王一成 ² ; 吴润 ¹ ; 袁秀芳 ² ; 徐丽华 ² ; 李军星 ² ; 王朝文 ¹ ;

作者机构： 1.甘肃农业大学

2.浙江省农业科学院

关键词： CSFV;PRRSV;JEV;多重二温式PCR

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2010 年 25 卷 06 期

页码： 38-43

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过对Genbank登录的CSFV、PRRSV和JEV的核苷酸序列进行比对分析,找出CSFV的E2基因,PRRSV的Nsp2基因和JEV的E基因为相对保守区域[1]。利用生物学软件在保守序列分别设计一对引物,通过对PCR反应条件的优化,确定了最佳引物浓度、最佳Mg2+浓度和最佳退火温度,建立了多重二温式PCR方法检测CSFV、PRRSV和JEV。其扩增的目的片断大小分别为CSFV(482 bp)、PRRSV(576 bp)和JEV(375 bp),将传统三温式PCR过程中的退火与延伸合并为一步,从而大大节省临床检测时间,同时又能通过一个反应体系对CSFV、PRRSV及JEV三种猪主要RNA病毒病进行检测。用50份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为93%以上。表明建立的多重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。