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副猪嗜血杆菌CDT三顺反子的表达、组装及生物学活性

文献类型： 中文期刊

作者： 李军星 1 ; 余斌 1 ; 徐丽华 1 ; 苏菲 1 ; 叶十一 1 ; 袁秀芳 1 ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 副猪嗜血杆菌;细胞致死性膨胀毒素;三顺反子质粒;完整毒素

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN：

年卷期： 2024 年 002 期

页码： 283-289

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 副猪嗜血杆菌是猪的常见病原菌，以异源三聚体形式分泌到胞外环境的细胞致死性膨胀毒素（CDT）是该菌重要的毒力因子，制备完整的重组CDT对于其功能研究至关重要。本研究构建了可用于同时表达CDT 3个亚基的三顺反子重组质粒，优化了完整毒素三聚体的体外组装及纯化方法，并验证了重组三聚体毒素的生物学活性。结果显示，CDT 3个亚基以CdtA/CdtB/CdtC-his方式组合时，按0.1 g/L等体积混合，在PBS中以尿素浓度梯度透析时组装效果最好。构建的重组三顺反子质粒在大肠杆菌中可以同时表达出比例相当的3个CDT亚基，并且均以包涵体形式存在，经包涵体离心粗纯化后，即可用于重组三聚体CDT的组装。组装的三聚体CDT经亲和层析及分子筛层析纯化，得到高纯度的完整毒素。完整毒素可以引起Marc145细胞体积明显膨胀，且分裂周期停滞于G2/M期的细胞比例显著增加。结果表明，本研究建立了一种简单有效的副猪嗜血杆菌重组CDT完整毒素制备方法，所制备的CDT具有良好的生物学活性。

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