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新城疫病毒SX-1株F基因定点突变及真核表达研究

文献类型： 中文期刊

作者： 李红丽 1 ; 詹丽娥 1 ; 张伟业 1 ; 王彩先 1 ; 唐娟 1 ; 陆冰洋 1 ;

作者机构： 1.山西省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 麻鸡;新城疫病毒;F基因;定点突变;表达

期刊名称： 中国家禽

ISSN： 1004-6364

年卷期： 2011 年 33 卷 05 期

页码： 19-22

收录情况： 北大核心

摘要： 根据已发表的分离自麻鸡的新城疫病毒SX-1株F基因序列,采用PCR体外定点突变技术,设计2对引物,引物中含有突变位点。应用重叠PCR延伸法,分3次PCR扩增F基因,从而得到突变后的F基因,命名为F′基因,使改造后的F′基因编码的氨基酸裂解位点为112Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu117。在EcoRⅠ和HindⅢ位点将F′基因与转座载体pFastBacⅠ连接,获得重组质粒,并进行PCR、酶切鉴定,核苷酸序列测定正确的pFastBac-F′质粒转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得的重组Bacmid F′质粒转染Sf-9昆虫细胞,并进行表达检测,表达产物间接免疫荧光试验阳性,经SDS-PAGE、Western-blotting检测显示,获得分子量约63ku的蛋白特异条带,说明F′重组蛋白表达成功。

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