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瘤胃脂肪分解菌实时荧光定量PCR方法的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 范文斌 1 ; 刘永斌 2 ; 李长青 2 ;

作者机构： 1.呼和浩特职业学院

2.内蒙古农牧业科学院

关键词： 瘤胃脂肪分解菌;实时荧光定量PCR;标准品质粒;标准曲线

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2015 年 30 卷 01 期

页码： 154-157

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为定量测定瘤胃脂肪分解菌,试验构建了脂肪分解菌实时荧光定量PCR的标准品及标准曲线。提取瘤胃微生物总DNA,以脂肪分解菌16S r DNA特异性引物进行PCR扩增,回收PCR产物,与PMD19-T Vector连接并转化大肠杆菌。阳性重组质粒经PCR和测序鉴定后,将提取的质粒DNA进行梯度稀释并作为模板,利用荧光定量PCR反应做出标准曲线。结果显示:PCR产物与目的基因的相似性大于99%,以不同稀释度的重组质粒为模板获得的荧光定量PCR扩增曲线差异明显,构建了相关系数接近1的标准曲线,且熔解曲线峰值单一。试验建立的实时荧光定量PCR方法可用于瘤胃脂肪分解菌的定量检测,为进一步研究该菌在反刍动物瘤胃发酵中的分子机理奠定了基础。

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