文献类型： 中文期刊

作者： 赵星 ¹ ; 程伊洛 ¹ ; 卢琴 ² ; 邵华斌 ² ; 杨玉莹 ¹ ; 罗青平 ² ;

作者机构： 1.长江大学动物科学学院

2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 裂解基因E;核酸酶A;致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影;穿梭质粒

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2017 年 39 卷 03 期

页码： 186-190

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备高裂解效率的致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影,本研究通过编码15个柔性氨基酸linker采用融合PCR法将噬菌体中Φ174的裂解蛋白E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因(SN)串联(E-15L-SN),插入温控表达质粒pBV220,构建重组温控双裂解表达质粒(pBV-ES),采用PCR扩增其温控双基因裂解表达盒(DLS-ES)插入E.coli-Pasteurella(大肠杆菌和巴氏杆菌)穿梭质粒pBA1100,构建重组温控双基因裂解穿梭质粒pBA1100-DLS-ES。该质粒可以通过温控制备高裂解率的E.coli和Pasteurella两种菌的菌影。本实验将构建的pBA1100-DLS-ES电转化至致禽肾脏、肠道病变E.coli中,28℃集菌,42℃温控诱导裂解蛋白E和核酸酶A表达。OD_(600nm)值及电镜结果表明,双基因裂解率高于单基因,同时收集菌影时间也比单基因裂解短,42℃诱导2 h含双裂解基因的菌液处理菌体裂解率达到99.9999%,本实验利用菌影形成机制将含青霉素抗性的致禽肾脏、肠道病变E.coli制备成菌影,为新型菌影疫苗的制备提供实验依据。