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猪流感病毒一步法荧光定量RT-PCR诊断方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 徐敏 1 ; 李志强 2 ; 黄元 3 ; 陈晶 4 ; 陈少勤 5 ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪病研究室

2.广东省农业科学院果树研究所

3.广东省农科院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室

4.华南农业大学兽医学院

5.广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室

关键词： 猪流感病毒;一步法荧光定量RT-PCR;TaqMan探针

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2011 年 10 期

页码： 1021-1025

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立一种在猪流感流行病学调查和临床诊断中应用的快速高效的诊断方法,根据猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)M基因的保守序列,设计并合成1对特异性引物和1条特异性TaqMan探针,建立了以RNA为反应模板的一步法荧光定量RT-PCR诊断方法。使用含有M基因的重组质粒作为标准品绘制标准曲线,该曲线效率值为2.014,误差值为0.005。试验结果表明,该方法灵敏度极高,最低可检测到10 copies的核酸;临床样品检测结果也显示其灵敏度高于普通PCR和病毒分离法;特异性强,对猪群常见的其他6种病毒检测结果均为阴性。临床样品检测显示,该方法操作简单,可以用RNA作为模板直接检测,节省时间,而且特异性好、灵敏度高,是可以应用于猪流感流行病学调查的一种可靠的诊断方法。

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