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逆转录聚合酶链式反应检测古典猪瘟病毒的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 范必勤 1 ; 赵启祖 1 ; 谢庆阁 1 ;

作者机构： 1.江苏省农科院胚胎工程实验室，南京大学生物系，中国农业科学院兰州兽医研究所

关键词： 古典猪瘟病毒，逆转录聚合酶链式反应，核酸杂交，基因检测

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 10061304

年卷期： 1994 年 01 期

页码：

摘要： 应用逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），对分别用异硫氰酸肌法和Ｌｙｓｉｓｂｕｆｆｅｒ法从古典猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）强毒和弱毒的细胞毒及脾血毒中提取的总ＲＮＡ进行逆转录，并对病毒基因组中的两个区段（Ｐ８０和ｇｐ４４／４８蛋白编码区）进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳检测均得到４１０及３００ｂｐ的特异性核酸扩增片断。前者检测病毒核酸的敏感度为１００．５～１．５ＴＣＩＤ５０，后者的敏感度为１０－２．５ＴＣＩＤ５０。而无病毒感染的ＰＫ１５细胞培养液和其它病毒（如口蹄疫病毒）细胞培养液作同样处理，未得到核酸带。用ＰＣＲ扩增产物与ＣＳＦＶ基因组寡核昔酸探针进行杂交，进一步证实扩增的酸带为ＣＳＦＶ基因组中的序列，且用ＰＣＲ与核酸杂交相结合的方法，又使检测的敏感度提高了１０～１００倍。通过裂解细胞，快速提取总ＲＮＡ，进行逆转录－ＰＣＲ扩增，建立了快速、灵敏、持异性的ＲＴ－ＰＣＲ检测ＣＳＦＶ的新方法。

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