文献类型： 中文期刊

作者： 赵文卿 ¹ ; 薄新文 ¹ ; 普娜 ² ; 张玉霞 ² ; 陈旭珂 ² ; 张艳艳 ² ; 孙艳 ² ; 齐萌 ¹ ; 王正荣 ² ;

作者机构： 1.塔里木大学动物科学与技术学院

2.新疆农垦科学院畜牧兽医研究所

关键词： 细粒棘球绦虫;EgBAL基因;生物信息学分析;原核表达

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2025 年 52 卷 002 期

页码： 801-810

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】探究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)胆盐活化脂肪酶(EgBAL)的生物信息学特征并进行原核表达，检测EgBAL重组蛋白的免疫原性，为囊性棘球蚴病疫苗抗原筛选提供理论依据。【方法】从NCBI数据库获取细粒棘球绦虫EgBAL基因序列(GenBank登录号：HM748917),设计特异性引物，以细粒棘球绦虫原头蚴cDNA为模板，通过PCR扩增并克隆EgBAL基因。使用Mega 7.0软件，通过邻接法(NJ)构建系统进化树，运用生物信息学软件对EgBAL蛋白理化性质和结构特征进行预测分析。构建含EgBAL基因重组pET-22b质粒，并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞诱导表达EgBAL重组蛋白，通过SDS-PAGE检测蛋白表达情况，并进行纯化。利用Western blotting分析重组蛋白的免疫原性。【结果】细粒棘球绦虫EgBAL基因片段大小为1 020 bp。系统进化树显示，EgBAL蛋白与中华树鼩EgBAL蛋白处于同一分支，进化距离较近，相似性高达99.60%。生物信息学分析显示，EgBAL基因全长1 014 bp,编码337个氨基酸，EgBAL蛋白分子质量为37 089.59 u,理论等电点为4.77,不稳定指数为44.72,为不稳定蛋白，脂肪系数为66.11,亲水性为-0.429,为亲水性蛋白，无跨膜区域及信号肽。EgBAL蛋白具有14个潜在B细胞抗原表位，二级结构包括α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲，分别占27.90%、12.76%、12.76%和56.08%。此外，EgBAL蛋白含有35个磷酸化位点，其中包括12个丝氨酸磷酸化位点、16个苏氨酸磷酸化位点和7个酪氨酸磷酸化位点。本研究成功构建重组pET-22b-EgBAL质粒，诱导表达得到EgBAL重组蛋白大小约38 ku。Western blotting结果显示，该重组蛋白可被细粒棘球绦虫感染的昆明小鼠和犬的阳性血清识别，具有良好的免疫原性。【结论】本研究成功克隆了细粒棘球绦虫EgBAL基因、表达了EgBAL重组蛋白，并初步证实重组EgBAL蛋白具有较好的免疫原性，提示其有作为囊型棘球蚴病疫苗或诊断候选抗原的潜力，为进一步研究EgBAL蛋白的功能提供了科学依据。