文献类型： 中文期刊
作者： 曲妮妮 1 ; 龚世园 2 ; 黄桂菊 1 ; 童金苟 3 ; 喻达辉 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院南海水产研究所
2.华中农业大学水产学院
3.中国科学院水生生物研究所
关键词： FIASCO法;合浦珠母贝Pinctada fucata;微卫星标记;分离与筛选
期刊名称： 热带海洋学报
ISSN： 1009-5470
年卷期： 2010 年 29 卷 03 期
页码： 49-56
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 用FIASCO(Fast Isolation by AFLP of Sequences Containing Repeats)技术开展了合浦珠母贝Pinctada fucata基因组微卫星标记的分离与筛选研究。合浦珠母贝基因组DNA经限制性内切酶MseI酶切后与接头连接,用生物素标记的(CA)15探针与其杂交,然后用磁珠富集、洗脱获得单链目的片段,经PCR扩增后形成双链,最后进行克隆转化,构建微卫星富集文库。挑选克隆用探针引物(CA)15和载体引物进行第2次筛选,获得阳性克隆357个,测序结果表明,297个克隆(83.2%)含有微卫星序列,包括479个微卫星DNA结构域。其中完美型微卫星有370个(77.3%),非完美型95个(19.8%),复合型14个(2.9%)。合成引物49对,有31对(63%)扩增出目的产物,其中9对在种群中(n=32)具有扩增多态性,其多态信息含量PIC值在0.375―0.809之间,平均为0.536;等位基因数在2―9个之间,平均为4.889个;观测杂合度介于0.200―0.600之间,平均为0.415;期望杂合度的变化范围为0.454―0.844,平均为0.598。表明FIASCO技术适合于合浦珠母贝微卫星标记的分离与筛选。
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