文献类型： 中文期刊

作者： 李颖波 ¹ ; 宗营杰 ¹ ; 刘成洪 ¹ ; 陆瑞菊 ¹ ; 黄剑华 ¹ ; 杜志钊 ¹ ; 许建华 ¹ ; 王亦菲 ¹ ;

作者机构： 1.上海市农业科学院生物技术研究所上海市农业遗传育种重点实验室;上海市农业科技服务中心;光明种业有限公司

关键词： 盐胁迫;大麦;酵母双杂交;cDNA文库

期刊名称： 上海农业学报

ISSN： 1000-3924

年卷期： 2019 年 06 期

页码： 1-5

摘要： 为研究盐胁迫下大麦耐盐相关蛋白的互作蛋白,利用Gateway技术构建盐胁迫下大麦的酵母双杂交文库。首先提取受盐胁迫的大麦总RNA,分离mRNA并合成双链cDNA,并通过位点特异重组系统(BP重组)将双链cDNA转入pDONR22载体,构建初级文库。然后,将初级文库质粒通过同源重组转入pGADT7-DEST载体,构建次级文库。最后,将次级文库质粒转入酵母菌株Y187中构建酵母双杂交文库。经鉴定,该酵母双杂交文库的滴度为7.0×10~7 CFU/mL,插入cDNA片段平均长度大于1 000 bp,重组率大于95.8%。所构建的酵母双杂交文库质量较高,可用于后续的互作蛋白筛选工作。