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无乳链球菌分选酶A的表达、纯化与活性检测

文献类型： 中文期刊

作者： 张露珊 1 ; 董靖 2 ; 周顺 2 ; 刘永涛 2 ; 胥宁 2 ; 杨秋红 2 ; 艾晓辉 1 ;

作者机构： 1.上海海洋大学水产与生命学院

2.中国水产科学研究院长江水产研究所

关键词： 无乳链球菌;分选酶A;催化活性;靶标;荧光共振能量转移;活性检测

期刊名称： 华中农业大学学报

ISSN： 1000-2421

年卷期： 2020 年 39 卷 004 期

页码： 99-104

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以提取的无乳链球菌ATCC51487菌株全基因组为模板,通过PCR扩增出srtAΔN 82基因,经Eco RⅠ和XhoⅠ 双酶切、抗性筛选等方法构建重组表达载体,测定不同诱导温度、诱导剂浓度及诱导时间对表达产物的影响,利用亲和层析和离子交换层析纯化蛋白,并使用荧光共振能量转移法测定蛋白活性.结果显示,试验构建的pGEX-6p-1-srtAΔN 82载体转化至BL21(DE3)后,在37℃条件下经1 mmol/L IPTG诱导表达6 h后可得到大量的可溶性蛋白,且纯度大于85%.纯化后的SrtAΔN 82与底物作用后,可显著提高反应体系的荧光强度,表明得到的SrtAΔN 82具有较好的生物学活性.

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