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美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)普通PCR和SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 孔文迪 1 ; 陈曦 1 ; 杨金先 1 ; 葛均青 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院生物技术研究所

关键词： 美洲鳗鲡腺瘤病毒（AEAdoV）;普通PCR;荧光定量PCR;SYBR GreenⅠ;检测方法

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2024 年 004 期

页码： 214-221

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立美洲鳗鲡腺瘤病毒（AEAdoV）的检测方法，根据AEAdoV福建株（AEAdoVFJ）的superfamily 3 helicases （S3H）序列，设计引物，建立了AEAdoV的普通PCR和qPCR检测方法；进一步评价检测方法的灵敏性、特异性及重复性，利用2种方法对美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病料进行了检测，并对美洲鳗鲡体内不同组织的病毒含量进行分析。结果显示，普通PCR扩增的目的片段长度约300 bp，利用其构建的qPCR质粒标准品，其拷贝数与qPCR阈值循环数（Ct）线性关系良好，线性范围广，标准曲线相关系数（R2）达到0.999，扩增效率为105.067%。建立的普通PCR法和qPCR的最低检测AEAdoV拷贝数分别为100个和10个。2种方法均可特异性检测AEAdoV，而对蛙虹彩病毒（RGV）、鳗鲡疱疹病毒（AngHV）、鲤疱疹病毒（KHV）、对虾白斑综合征病毒（WSSV）、日本鳗鲡内皮细胞坏死病毒（JEAdoV）和花鳗鲡腺瘤病毒（MEAdoV）均无扩增反应。qPCR法的组内和组间变异系数均小于2%，表明其重复性良好。临床应用结果显示，35份美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病料，采用普通PCR法的AEAdoV检出率为82.8%，而qPCR法的AEAdoV检出率为97%。对美洲鳗鲡不同组织的病毒含量分析结果显示，心脏、肝脏、鳃、鳍的AEAdoV相对含量较高，而黏液、皮肤和脾脏的病毒含量相对较低。研究表明，建立的AEAdoV的灵敏度高、特异性强的普通PCR和qPCR检测方法，证实AEAdoV与美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病密切相关，且在感染鳗鲡主要组织中都存在。实验结果对于研究AEAdoV的致病性，开展其流行情况和病原学情况分析具有重要意义。

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