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鳗鲡疱疹病毒实时荧光重组酶辅助扩增(RAA)检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 陈曦 1 ; 杨金先 1 ; 葛均青 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院生物技术研究所

关键词： 鳗鲡疱疹病毒（AngHV）;实时荧光RAA;快速检测

期刊名称： 大连海洋大学学报

ISSN： 2095-1388

年卷期： 2024 年 002 期

页码： 234-240

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus, AngHV）的实时荧光重组酶辅助扩增（recombinase-aided amplification, RAA）检测方法，根据AngHV的ORF95基因序列设计引物和探针，优化反应温度，确定反应时间，并应用该方法对采集的临床样品进行检测。结果表明：本研究中建立的实时荧光RAA检测方法的最佳反应温度为39℃,反应时间为20 min;实时荧光RAA检测方法的灵敏度、特异性及重复性评价显示，RAA检测AngHV的最低检测量为1×10~2 copies/μL,可特异性地检测AngHV,与美洲鳗鲡腺瘤病毒（American eel adomavirus, AEAdoV）、蛙虹彩病毒（Rana grylio virus, RGV）、鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus, KHV）和对虾白斑综合征病毒（White spot syndrome virus, WSSV）均无交叉反应；实时荧光RAA检测方法的组内和组间变异系数均小于5%,表明实时荧光RAA检测方法灵敏度高、特异性强和重复性好；应用该方法对采集的25份临床样品进行检测显示，实时荧光RAA检测方法与qPCR方法的检出率一致，均为92%,高于普通PCR的检出率（76%）。研究表明，本研究中所建立的鳗鲡疱疹病毒实时荧光重组酶辅助扩增RAA检测方法快速、灵敏、可靠、准确，可用于AngHV的临床快速检测和流行病学调查。

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