文献类型： 中文期刊

作者： 李哲 ¹ ; 贺永国 ² ; 黄绵佳 ² ; 曾宪海 ¹ ; 林位夫 ¹ ; 刘洁琼 ¹ ; 张春红 ¹ ; 李运合 ³ ; 马晓晓 ⁴ ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室

2.海南大学园艺园林学院

3.中国热带农业科学院南亚热带作物研究所

4.海南大学农学院

关键词： 橡胶树;HbHMGR1基因;乳管特异性启动子PHEV2.1;易碎愈伤组织;遗传转化

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2016 年 47 卷 05 期

页码： 597-603

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】以3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶1基因(Hb HMGR1)乳管表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1转化橡胶树易碎胚性愈伤组织,获得抗性转基因材料,为研究Hb HMGR1基因的乳管特异性表达及提高橡胶产量打下基础。【方法】用根癌农杆菌EHA105介导表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1转化橡胶树品种热研8-79花药易碎胚性愈伤组织,经卡那霉素筛选数月后,对抗性愈伤组织进行GUS染色和分子检测。【结果】经过对根癌农杆菌侵染的易碎愈伤组织进行4~6个月筛选,得到5个GUS检测呈阳性的抗性愈伤组织系;取其中的2号和11号抗性愈伤组织系进行PCR鉴定,均能扩增出与阳性对照相同的特异片段,uid A、NPTII和PHEV2.1-Hb HMGR1序列的目的片段大小分别为829、797和3592 bp。2号和11号抗性愈伤组织系经反向PCR鉴定,发现2号抗性愈伤组织系未扩增出目的条带,而11号抗性愈伤组织系扩增获得一条约2000 bp的条带,包含T-DNA序列和一段未知的DNA序列,其中未知DNA序列是橡胶树品种热研8-79基因组的一段连续序列。【结论】将植物表达载体的T-DNA整合到抗性愈伤组织系基因组DNA中,可获得一个含35S-NPTII-PHEV2.1-Hb HMGR1-35S-uid A的转基因愈伤组织系。