文献类型： 中文期刊

作者： 陈沁滨 ¹ ; 侯喜林 ¹ ; 王建军 ¹ ; 冷月强 ¹ ; 蒋芳玲 ¹ ; 薛萍 ² ;

作者机构： 1.南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室

2.连云港市农业科学院

关键词： 洋葱;RAPD-PCR反应体系;扩增程序;正交设计

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2006 年 22 卷 04 期

页码： 434-438

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立多态性高、稳定性好的洋葱RAPD-PCR反应体系,采用正交设计,研究了Taq酶、Mg2+、引物和dNTP 4种RAPD-PCR反应组分浓度变化对扩增结果的影响,在此基础上对模板DNA用量、扩增程序中退火温度和反应循环次数进行了筛选。试验结果表明,洋葱20μl RAPD-PCR优化反应体系为1×Buffer、2.0 mmo1/L Mg2+、1.0 UTaqDNA聚合酶、200μmo1/L dNTP、0.6μmo1/L引物、2%甘油和15 ng DNA模板;PCR扩增程序为94℃预变性4 m in;94℃变性30 s,35℃退火40 s,72℃延长1.5 m in,45个循环;72℃保温延伸7 m in。