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一种基于温敏质粒的新型基因敲除方法

文献类型： 中文期刊

作者： 姜娜 1 ; 王艳春 2 ; 马志宏 1 ; 罗琳 1 ; 刘纯杰 2 ;

作者机构： 1.北京市农林科学院北京市水产科学研究所

2.军事医学科学院生物工程研究所

关键词： 伤寒沙门氏菌;温敏质粒;λRed重组系统;ssaV;基因敲除

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2010 年 30 卷 03 期

页码： 85-89

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 基于温敏型质粒而不用线性DNA的方法用于快速敲除沙门氏菌染色体上的目的基因。以伤寒沙门氏菌S.ty2基因组为模板扩增得到的ssaV基因的上下游同源臂,与两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段连接到温敏型质粒pHY304,共同构建同源重组载体;然后转化S.ty2,通过筛选得到带有抗性标记的重组菌。通过转入重组酶表达质粒pCP20,去除抗性标记,得到ssaV基因缺失的重组菌,并在DNA水平进行了鉴定。建立了一种改进的基于温敏质粒的沙门氏菌的基因敲除方法,此方法也值得在其他革兰氏阴性菌的基因敲除中尝试应用。

  • 相关文献

[1]植物功能基因组研究方法及进展. 高泽发,陈绪清,杨凤萍,梁荣奇,张立全,张晓东. 2005

[2]鼠伤寒沙门菌rpoS基因缺失菌株的构建及RpoS因子在环境胁迫下的作用. 梁运改,桂萌,王顺,刘密,张清,周康. 2018

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