文献类型： 中文期刊

作者： 宋子昂 ¹ ; 李占鸿 ² ; 杨振兴 ² ; 李卓然 ² ; 刘威 ³ ; 李华春 ² ; 廖德芳 ² ; 杨恒 ² ;

作者机构： 1.云南农业大学动物医学院

2.云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室

3.内蒙古自治区农牧业科学院

关键词： 蓝舌病病毒;血清型;实时荧光定量RT-PCR;应用

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2021 年 008 期

页码： 2920-2932

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【背景】蓝舌病病毒（Bluetongue virus,BTV）是一种严重危害反刍动物的虫媒病毒,我国存在12种血清型BTV （BTV-1、-2、-3、-4、-5、-7、-9、-12、-15、-16、-21和-24）的流行。【目的】建立12种血清型BTV的RT-qPCR定型方法,为BTV的诊断与流行病学研究提供技术保障。【方法】根据我国流行BTV基因节段2 （Seg-2）序列设计引物和TaqMan探针,对引物的特异性与敏感性进行评估;以12种血清型BTV毒株和核酸阳性血液样本验证建立的血清型RT-qPCR检测方法;将其应用于库蠓与动物血液样本中BTV的定型。【结果】建立的BTV血清型RT-qPCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,反应的扩增效率（E）值>90.3%,相关系数（R2）值在0.991-0.999之间,对12种血清型BTV核酸的检测下限在25-48拷贝之间。对165株BTV的RT-qPCR定型结果与病毒的Seg-2测序鉴定结果一致;对194份采集于哨兵动物的BTV核酸阳性血液样本的RT-qPCR定型结果与感染动物上分离BTV的血清型一致。采用建立的方法,从2019年云南省师宗县与景洪市采集的库蠓与牛血液样本中鉴定出6种血清型的BTV（BTV-1、-2、-4、-5、-16和-24）。【结论】研究建立的12种BTV血清型RT-qPCR定型方法具有特异、敏感和省时的优点,可用于媒介与动物感染BTV的血清型定型,具有良好的应用与推广价值。