文献类型： 中文期刊

作者： 张蓉蓉 ¹ ; 潘爱銮 ¹ ; 吴娟 ² ; 方兵兵 ³ ; 汪最 ¹ ; 卢琴 ¹ ; 张腾飞 ¹ ; 温国元 ¹ ; 罗青平 ¹ ;

作者机构： 1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

2.武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司

3.武汉科前生物股份有限公司

关键词： 鸭坦布苏病毒;非结构蛋白;亚细胞定位;IFN-β信号通路

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2024 年 51 卷 012 期

页码： 5470-5478

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用.[方法]通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS-HA,构建重组真核表达质粒,并分别转染至HEK-293T细胞,通过Western blotting检测蛋白表达;利用间接免疫荧光试验检测非结构蛋白的亚细胞定位情况,通过双荧光素酶报告试验研究DTMUV的非结构蛋白对鸭源IFN-β启动子活性的影响.[结果]试验成功构建DTMUV的7个非结构蛋白带HA标签的真核表达质粒.Western blotting结果显示,真核表达非结构蛋白均正常表达,NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B 和 NS5 蛋白分子质量大小分别为 38、25、14.4、68、13.9、28 和 100 ku.间接免疫荧光试验结果显示,7个非结构蛋白在细胞内的表达形态不一,主要定位在细胞浆中.双荧光素酶报告试验结果表明,与对照组相比,过表达NS2B和NS4B蛋白后,鸭源IFN-β启动子活性极显著降低(P<0.01).[结论]本研究成功构建了DTMUV的7个非结构蛋白的真核表达质粒,非结构蛋白主要表达于细胞浆中,其中NS2B和NS4B蛋白具有颉颃IFN-β活性的功能.试验结果为DTMUV的免疫逃逸研究提供了一定的理论依据,并为深入探究DTMUV在宿主天然免疫信号通路中的作用机制提供了试验材料.