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嗜水气单胞菌气溶素的表达纯化和活性实验

文献类型： 中文期刊

作者： 董靖 1 ; 刘永涛 1 ; 胥宁 1 ; 杨秋红 1 ; 杨移斌 1 ; 艾晓辉 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院长江水产研究所

关键词： 嗜水气单胞菌;气溶素;原核表达;纯化;溶血活性;PCR扩增;分子克隆

期刊名称： 中国渔业质量与标准

ISSN： 2095-1833

年卷期： 2019 年 01 期

页码： 27-33

摘要： 气溶素(AerA)是嗜水气单胞菌分泌的重要毒力因子之一。为开展抗气溶素药物的筛选,本实验设计得到高纯度的气溶素重组蛋白并研究其生物学活性。本实验依据嗜水气单胞菌气溶素基因(aerA)序列设计特异性引物,采用PCR扩增、酶切、连接构建aer A-p GEX-6p-1原核表达载体,经测序验证后将其转化至BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导、亲和层析、离子交换层析纯化,然后进行溶血试验测定其生物学活性。结果表明,当表达温度为16℃,经0. 2 mmol/L IPTG诱导表达16 h后可得到可溶性蛋白,纯化后其纯度大于95%,该蛋白对绵羊红细胞的溶血单位为54. 17 HU/μg。本实验通过原核表达、纯化得到的可溶性重组气溶素蛋白,具有良好的溶血活性,为进一步探究气溶素功能及其应用铺垫基础。

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