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灰飞虱脂肪酶LsLPS的原核表达及Ni-NTA纯化

文献类型： 中文期刊

作者： 王利华 1 ; 张玉 1 ; 郑州廷 2 ; 曹越 2 ; 纪锐 2 ; 方继朝 2 ;

作者机构： 1.南京农业大学植物保护学院

2.江苏省农业科学院植物保护研究所

关键词： 灰飞虱;脂肪酶;LsLPS基因;原核表达;Ni-NTA纯化

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2022 年 38 卷 003 期

页码： 611-616

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 灰飞虱是危害中国水稻的3种主要稻飞虱之一.脂肪酶是脂肪代谢的关键酶,在昆虫发育、繁殖等生理活动中具有重要作用.为了深入研究脂肪酶(LsLPS)在灰飞虱生长发育中的功能,本研究克隆了LsLPS基因ORF序列,并进行了原核表达和His标签融合蛋白的纯化.结果显示,灰飞虱LsLPS开放阅读框长1293 bp,可翻译成430个氨基酸,含有信号肽序列和PF00151结构域.LsLPS连接到原核表达载体pET28a(+)-SUMO、pCold I后在表达菌株BL21(DE3)中主要以包涵体形式表达,连接到pET43.1a(+)后可在表达菌株BL21(DE3)中可溶性表达.采用pH 8.0、含20 mmol/L咪唑的磷酸缓冲液作为平衡液,Ni-NTA纯化LsLPS-pET43.1a(+)融合蛋白的纯度和产量相对较高.

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