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新疆大叶紫花苜蓿BADH基因转化体系的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 张丽 1 ; 甘晓燕 1 ; 石磊 1 ; 陈虞超 1 ; 聂峰杰 1 ; 宋玉霞 1 ;

作者机构： 1.宁夏农林科学院农业生物技术研究中心

关键词： 紫花苜蓿;转化;农杆菌;BADH基因;转基因植株

期刊名称： 草地学报

ISSN： 1007-0435

年卷期： 2014 年 22 卷 02 期

页码： 147-153

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以新疆大叶苜蓿(Medicago sativa‘Xinjiang Daye')叶片作为转化受体,利用农杆菌介导法将从梭梭(Haloxylon ammodendron)中获得的甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)转化紫花苜蓿,研究选择剂卡那霉素对愈伤组织分化的影响,并采用正交试验设计优化了影响紫花苜蓿转化的4个主要因子,建立了农杆菌介导的紫花苜蓿高效转化体系,获得了转基因植株。结果表明:卡那霉素在愈伤组织分化培养时的上限浓度以50 mg·L~(-1)为宜;转化过程中当浸染时间为5 min,菌液浓度OD_(600)为0.2,外植体预培养6 d,共培养后清洗外植体的头孢雷素(Cef)浓度为800 mg·L~(-1)是最佳转化方案,抗性芽分化率达到65.5%;4个因子中菌液浓度对转化率影响最大,清洗外植体的Cef浓度和浸染时间影响次之,外植体预培养时间的影响最小。经PCR和RT-PCR检测,初步证明了BADH基因已经整合到紫花苜蓿中,转化率为16.0%。

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