文献类型： 中文期刊

作者： 金前跃 ¹ ; 王寅彪 ² ; 冯丽丽 ³ ; 李华玮 ⁴ ; 郭振华 ¹ ; 邢广旭 ¹ ; 张改平 ⁵ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院

2.新乡医学院公共卫生学系

3.河南省农业科学院农业经济与信息研究所

4.河南牧业经济学院动物医药学院

5.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室

关键词： PRRSV-GP5胞外区;串联表达;免疫原性分析

期刊名称： 现代牧业

ISSN： 1008-3111

年卷期： 2021 年 5 卷 001 期

页码： 1-5,26

摘要： 为建立基于GP5蛋白的PRRSV中和抗体检测方法,本实验通过基因合成技术将GP5蛋白的胞外区(GP5-ecto)进行串联合成,并将该串联基因克隆到pET28a载体上,在37℃培养含重组质粒pET28a-GP5-ecto的E.coli BL21(DE3)细胞至OD600值为0.6~1.0时,以终浓度为0.5 mM的IPTG诱导4 h后,重组GP5-ecto蛋白实现了高效表达.Western blot证实GP5-ecto蛋白能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应.Ni-NTA亲和层析纯化后,间接ELISA证实1:400倍稀释的PRRSV阳性猪血清可检测到低至0.125μg/ml的GP5-ecto蛋白,表明GP5-ecto蛋白具有良好免疫原性.IFA试验证实GP5-ecto蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的鼠血清能与天然PRRSV发生反应,说明重组蛋白与病毒天然蛋白的结构具有较高的相似性.本研究获得的GP5-ecto纯化蛋白,为PRRSV中和抗体ELISA检测方法的建立提供了材料.