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毕赤氏酵母/hGM-CSF工程菌的构建及表达分析

文献类型： 中文期刊

作者： 杨国峰 1 ; 周鹏 1 ; 张泰芳 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室、热带生物技术所

关键词： hGM-CSF;毕赤氏酵母;载体构建;表达分析

期刊名称： 药物生物技术

ISSN： 1005-8915

年卷期： 2003 年 06 期

页码： 349-352

收录情况： CSCD

摘要： 为了探索利用毕赤氏酵母系统表达和生产人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,hGM-CSF)的可行性,使用经改造的hGM-CSF基因构建pGAPZa-A/hGM-CSF分泌型表达载体,转入毕赤氏酵母SMD1168(his 4,pep 4)菌株和GS115(his 4)菌株,利用斑点杂交技术筛选hGM-CSF基因阳性菌株,利用SDS-PAGE和TF-1依赖细胞株/MTT比色法对工程菌株的分泌产物进行表达和生物活性分析,最后筛选得到7个hGM-CSF基因阳性菌株,其中有3个工程菌株的杂蛋白较少且主带蛋白质相对分子质量与经改造的hGM-CSF基因相对分子质量保持一致,这3个工程菌株的分泌蛋白质样品都具有天然hGM-CSF的生物活性,经初步提取,活性单位分别为2.28×105U/ml、2.22×105U/ml和2.46 × 105U/ml。从而证明利用毕赤氏酵母系统表达hGM-CSF是可行的,为hGM-CSF的生产和临床应用打下了基础。

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