文献类型： 中文期刊
作者： 张怀军 1 ; 赵志祥 2 ; 陈绵才 1 ;
作者机构： 1.海南大学环境与植物保护学院
2.海南省农业科学院植物保护研究所
关键词： 基因组文库;Fosmid文库;克隆子;活性蛋白酶;象耳豆根结线虫
期刊名称： 西南农业学报
ISSN： 1001-4829
年卷期： 2015 年 28 卷 05 期
页码： 2129-2135
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 本文提取土壤样品总DNA,以Fosmid为载体,构建宏基因组文库。以脱脂奶为底物,象耳豆根结线虫为靶标,筛选杀象耳豆根结线虫的产蛋白酶基因克隆子。以克隆子Pro-21fa6为研究对象,从酶活、蛋白含量变化、p H变化对发酵过程进行了研究。结果表明,构建31 104个克隆子,库容1.067 Gb,获得产蛋白酶阳性克隆子111株,其中9株对象耳豆根结线虫具有毒杀作用,Pro-21fa6克隆子毒杀效果最好。培养条件温度35℃、转数200 r/min、以及脱脂奶与诱导剂共同作用可以使酶活提高,是基础培养基的1.33倍。Pro-21fa6蛋白酶克隆子初步研究,为蛋白酶基因基因片段亚克隆、测序、活性蛋白酶分离纯化奠定了基础。
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