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甘蔗花叶病毒VPg蛋白的原核表达及其在玉米中的免疫定位

文献类型： 中文期刊

作者： 秦艳红 1 ; 刘冬梅 1 ; 周涛 1 ; 范在丰 1 ;

作者机构： 1.中国农业大学植物病理学系农业生物技术国家重点实验室

关键词： 甘蔗花叶病毒;VPg;原核表达;免疫金定位

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2009 年 39 卷 06 期

页码： 608-612

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用RT-PCR方法从感染甘蔗花叶病毒北京分离株(SCMV-BJ)的玉米叶片中扩增得到VPg基因,将VPg基因连接到原核表达载体pET-28a上。获得的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,VPg在大肠杆菌中获得了高效表达,产生的融合蛋白分子量为30 kD。将融合蛋白纯化后免疫兔子获得了特异性较高的抗血清。ACP-ELISA测定抗血清的效价为1/4 096。利用该抗血清对健康玉米和病毒侵染的玉米茎、叶脉和叶片进行免疫金标记,结果表明在茎和叶脉的韧皮部筛管的细胞壁处有金颗粒。

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