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一种可降低PCR假阴性的槟榔潜隐病毒检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 李梦雨 1 ; 尹慧祥 2 ; 羊彬彬 2 ; 汪志伟 1 ; 王健华 2 ;

作者机构： 1.海南大学园艺学院

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： 槟榔;PCR假阴性;内标准物;槟榔隐症病毒

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2024 年 22 卷 001 期

页码： 108-116

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种可降低PCR假阴性的槟榔隐症病毒(arecapalmvelarivirus 1,APV1)检测方法,参考已报告的槟榔引物保守基因,设计槟榔内标准物引物和APV1引物,槟榔内标准物引物合成3对,APV1引物合成2对,进行PCR扩增筛选槟榔内标准物引物和APV1引物.运用双重PCR扩增方法,优化反应参数.内标准物引物和APV1引物的最适引物浓度比为1∶4,内标准物引物终浓度为0.2 μmol/L,APV1引物终浓度为0.8 μmol/L,最适退火温度为54 ℃,最适循环次数为30次.灵敏度结果表明,槟榔cDNA浓度稀释到10-6时,仍能扩增出目的条带.特异性结果显示,只有槟榔能检测到内标准物和APV1扩增出的目的条带.利用建立的双重PCR检测方法,对海南省万宁市的40份槟榔样品进行了检测,发现有25份样品感染APV1.本研究结果可为降低槟榔潜隐病毒PCR假阴性提供理论依据.

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