文献类型： 中文期刊
作者： 帅良 1 ; 李静 2 ; 韩冬梅 3 ; 吴振先 4 ;
作者机构： 1.华南农业大学园艺学院广东省果蔬保鲜重点实验室贺州学院食品科学与工程技术研究院广东省农业科学院果树研究所农业部南亚热带果树生物学与遗传资源利用重点实验室
2.华南农业大学
3.广东省农业科学院果树研究所
4.华南农业大学园艺学院
关键词： 龙眼;亚硫酸盐氧化酶;基因克隆;荧光定量PCR;原核表达
期刊名称： 果树学报
ISSN： 1009-9980
年卷期： 2015 年 32 卷 01 期
页码： 43-50
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 【目的】探讨龙眼果实亚硫酸盐氧化酶基因(DlSO)在硫残留生物降解中的作用。【方法】以龙眼总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE法获得龙眼亚硫酸盐氧化酶基因全长cDNA序列,命名为DlSO;运用荧光定量PCR对其表达量进行分析;使用ClontechIn-Fusion技术构建原核表达载体,使其在Rosetta(DE3)大肠杆菌中表达。【结果】DlSO序列全长1413bp,包含一个1182bp的开放阅读框,一个长37bp的5’非翻译区序列和194bp的3’非翻译区,预测编码393个氨基酸;同源性和系统进化分析结果均表明DlSO与毛果杨SO亲缘关系最近;荧光定量结果表明,在龙眼不同组织中,DlSO基因都有表达,其中在叶片中表达量最高,其次是花、幼果、根和果肉,在茎和果皮组织中DlSO基因的表达量最低;成功构建pET-32a-DlSO原核表达载体,经IPTG诱导后在Rosetta(DE3)大肠杆菌中成功表达。【结论】克隆了龙眼亚硫酸盐氧化酶基因(DlSO),并且成功构建了pET-32a-DlSO原核表达载体,经IPTG诱导在大肠杆菌中成功表达出融合蛋白,为下一步研究龙眼亚硫酸盐氧化酶的作用奠定了基础。
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