文献类型： 中文期刊

作者： 程晓霞 ¹ ; 陈仕龙 ¹ ; 王劭 ¹ ; 肖世峰 ¹ ; 江丹丹 ¹ ; 朱小丽 ¹ ; 陈少莺 ¹ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 鸭短喙矮小综合征病毒;弱毒株;免疫效力

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 46 卷 011 期

页码： 1132-1139

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为培育出鸭短喙矮小综合征病毒（SBDSV）弱毒株并评价其免疫效果，本研究将强毒SBDSV M15株在番鸭胚成纤维细胞（MDEF）中连续传95代（C95），每代均观察细胞病变（CPE）。结果显示，C1～C4代病毒接种的细胞均无CPE，从C5代开始出现CPE；自C50代以后，每代细胞出现CPE达80%的时间由接种后7 d逐渐缩短为5 d。采用《中国兽药典》附录中方法检测每隔10代病毒的纯净性；将每隔10代的病毒感染MDEF，通过间接免疫荧光试验（IFA）鉴定各代次病毒及测定各代次的病毒滴度(TCID₅₀)；将各代次病毒分别以不同剂量接种2日龄易感半番鸭，在21 d观察期内观察并记录各组半番鸭的临床症状、计算发病率及死亡率，于观察期结束后，对各组半番鸭称重并测量其喙长、喙宽，计算其喙长宽比等生长发育指标，评估各代次病毒对半番鸭的致病性。纯净性检测结果显示：检测的各代次病毒均无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染；IFA结果显示，感染不同代次SBDSV的MDEF均能被鹅细小病毒单克隆抗体（GPV MAb）识别，出现亮绿色特异性荧光，而阴性对照和其他相关病毒MAb作为一抗的MDEF中均无绿色荧光；病毒滴度测定及致病性试验结果显示，随着传代次数的增加，SBDSV的滴度逐渐升高(10^2.5TCID₅₀/0.1 mL～10^5.5TCID₅₀/0.1 mL)且趋于稳定的10^5.5TCID₅₀/0.1 mL;C10、C30和C50代病毒对雏鸭的致病性均较强，雏鸭均出现了一定的临床症状，生长发育受到影响，且雏鸭的发病率分别为87.5%（7/8）、37.5%（3/8）和25%（2/8），但均无死亡；C70代病毒组仅一只鸭出现体重略轻的症状，至C80代已失去对雏鸭的致病性，将致弱病毒命名为SBDSV MA株，将C80代致弱病毒命名为MA0株。将不同代次的致弱病毒MA0～MA15株均以5×10^5.5TCID₅₀分别接种2日龄半番鸭和樱桃谷鸭，观察21 d，评估致弱病毒的安全性。将上述不同代次的致弱病毒均以4×10～3TCID₅₀接种2日龄半番鸭，7 d后采血测定各组鸭血清中的中和抗体效价；同时各免疫组以5×10～4TCID₅₀的强毒SBDSV M15株攻毒，观察14 d，评估致弱病毒的免疫保护效果。将MA5代病毒在雏半番鸭体内连续盲传5代，评估该病毒的遗传稳定性。结果显示，不同代次致弱病毒（MA0、MA5、MA10、MA15）接种的两种雏鸭均无临床症状且生长发育均良好；各代次致弱病毒接种后7 d全部鸭血清均出现中和抗体，平均抗体效价在3.0Log2以上；攻毒后14 d，各免疫组鸭均无任何临床症状且生长发育良好，与阴性对照组鸭基本一致，且致弱病毒对雏鸭的免疫保护率均达100%;MA5代致弱病毒在雏鸭体内连续盲传5代，每代雏鸭均无任何临床症状，生长发育均正常，且各组实验鸭各器官均未出现剖检病变。上述结果表明，不同代次的SBDSV致弱株均纯净、安全性好、免疫原性和遗传稳定性较强，可作为SBDS弱毒疫苗的候选株，本研究为SBDS活疫苗的研制奠定了良好实验基础。