文献类型： 中文期刊

作者： 叶春秀 ¹ ; 赵曾强 ¹ ; 于航 ¹ ; 张国丽 ¹ ; 王建玉 ¹ ; 庄振刚 ¹ ; 张爱萍 ¹ ; 谢宗铭 ¹ ;

作者机构： 1.新疆农垦科学院生物技术所;作物种质创新与基因资源利用兵团重点实验室;新疆兵团农六师农业科学研究所

关键词： 甜瓜;蛋白激酶;CmPKC;克隆;原核表达

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2017 年 11 期

页码： 4371-4377

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据已知的甜瓜蛋白激酶类基因CmPKC的部分序列,设计带有酶切位点的引物,采用RT-PCR方法获得该基因的完整cDNA序列,并对其蛋白进行功能预测和理化性质分析;采用实时荧光定量PCR分析不同白粉病抗性材料、不同处理时间点该基因的表达量变化情况;将该基因完整的ORF连接到原核表达载体p EASY-E1上,转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),通过不同浓度IPTG诱导表达,获得适宜的诱导表达体系,SDS-PAGE检测表达产物。结果表明克隆获得的CmPKC基因长约为2 830 bp,开放阅读框为2 493 bp,编码831个氨基酸。生物信息学预测该蛋白的跨膜区域有4个信号肽;在甜瓜白粉病不同抗性材料上相对表达量变化趋势不同,在抗性材料上表达丰度出现的时间较感病材料早,且在不同材料上相对表达量变化趋势与已报道的一个甜瓜感病相关MLO家族基因一致,推测我们所获得的基因也可能与感病及开花、生长发育基因相关,且属于早期应答基因。该蛋白适宜的诱导体系是100 mg/m L IPTG诱导4 h,原核表达产物与预期大小一致,表明该基因能够成功表达,为深入探索该基因的功能提供了研究依据。