文献类型： 中文期刊

作者： 祁云霞 ¹ ; 刘晓芳 ² ; 张萍 ² ; 何小龙 ³ ; 邢玉梅 ² ; 达赖 ³ ; 特日格勒 ³ ; 刘永斌 ³ ; 荣威恒 ³ ;

作者机构： 1.中国科学院内蒙古草业研究中心

2.内蒙古自治区家畜改良工作站

3.内蒙古自治区农牧业科学院

关键词： 绵羊;卵巢;mi RNAs;芯片

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2015 年 48 卷 10 期

页码： 2039-2048

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】全面了解绵羊卵巢组织mi RNAs表达情况,分析产单羔和产双羔绵羊卵巢mi RNAs表达差异,从而为探讨mi RNAs在繁殖力调控中的作用提供依据。【方法】应用多物种mi RNA芯片对绵羊卵巢组织mi RNA进行表达分析。首先选择经产单羔羊和双羔羊,发情后采集双侧卵巢提取总RNA,分离小片段RNA与mi RNA芯片杂交,然后进行数据分析获得绵羊卵巢组织mi RNAs表达谱;利用生物信息学软件,以q-value≤5%,且Fold Change≥2或≤0.5的标准筛选单羔羊和双羔羊卵巢差异表达mi RNAs,并利用q-PCR技术验证芯片结果;分别采用micro T和mi RDB两种方法预测差异表达mi RNAs的靶基因,然后合并两种方法结果数据取二者的交集,用在线软件对靶基因进行GO功能注释。【结果】在检测的来自所有物种的mi RNAs中,有5 448个mi RNAs在单羔和双羔羊卵巢组织中共同表达,22个在单羔羊卵巢中特异性表达,15个在双羔羊卵巢中特异性表达;对绵羊中已报道的103个mi RNAs,比较其在两组母羊卵巢组织中的表达变化,共获得11个差异表达mi RNAs,其中4个上调表达,7个下调表达;随机选择一个上调和一个下调表达的mi RNAs进行q-PCR验证,定量结果与芯片结果一致,说明芯片结果准确、可信;预测获得7个mi RNAs的靶基因,分别是:oar-mi R-370-5p、oar-mi R-376b-5p、oar-mi R-381-5p、oar-mi R-412-5p、oar-mi R-541-3p、oar-mi R-544-5p和oar-mi R-1185-5p,每个mi RNA获得的靶基因个数分别为:115、71、1、5、8、135和23个。GO注释结果显示,mi R-376b-5p和mi R-1185-5p的靶基因主要参与形成细胞内组分和细胞器,在分子功能分类中,绝大部分基因为连接分子类和催化活性分子类,在生物学过程分类中,主要参与细胞增殖、分化、凋亡过程和代谢过程;同时mi R-376b-5p的靶基因IGF-1、DAZL、MTOR、MET、NEDD4和mi R-376b-5p的靶基因AHR参与生殖过程的调控。【结论】成功构建了绵羊卵巢mi RNAs表达谱,获得产单羔母羊和产双羔母羊卵巢组织差异表达mi RNAs,这些mi RNAs可能与绵羊卵泡发育和产羔数多少有关。