文献类型： 中文期刊

作者： 王露露 ¹ ; 刘欣婷 ¹ ; 周涛 ¹ ; 王娟 ¹ ; 贾东海 ¹ ; 李强 ¹ ; 侯献飞 ¹ ; 石必显 ¹ ; 顾元国 ¹ ; 兰海燕 ¹ ;

作者机构： 1.新疆大学生命科学与技术学院/新疆生物资源基因工程重点实验室;新疆农业科学院经济作物研究所

关键词： 聚丙烯酰胺凝胶电泳;银染;弥散现象;体系优化

期刊名称： 新疆农业科学

ISSN： 1001-4330

年卷期： 2019 年 12 期

页码： 2312-2319

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】针对银染PAGE实验中常出现的背景颜色深、条带弥散、凝胶变形及条带不整齐等问题进行归纳总结并提出优化方法。【方法】以甘蓝型油菜基因组DNA为研究对象,通过PAGE电泳后银染并调整试剂配方、实验条件,筛选出适合实验的技术体系。【结果】甲醇浓度、电压稳定性、电泳温度、气泡等显著影响实验结果。甲醛浓度过高(1.25%)时,虽所需染色时间短,但凝胶背景深;甲醛浓度过低(0.001 25%)时,背景浅但条带淡,需要长时间染色;电压不稳定会造成条带弥散;电泳温度过高,导致凝胶变形,条带弯曲;凝胶中的气泡会扰乱DNA条带的形状;NaOH浓度在0.875%～1.375%,染色结果无明显差异。【结论】甲醛用量4 mL(1%)、保持稳定电压、在冰浴中电泳、制胶时及时赶走所有气泡,可得到凝胶背景浅、条带清晰且正常的结果。