文献类型： 中文期刊

作者： 何媛媛 ¹ ; 王金朋 ¹ ; 邢启凯 ¹ ; 张玮 ¹ ; 李永华 ¹ ; 刘梅 ¹ ; 燕继晔 ¹ ; 黄彩萍 ¹ ;

作者机构： 1.北京市农林科学院植物保护研究所

关键词： 可可毛色二孢;同源重组;突变体;遗传转化;功能基因组

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2025 年 55 卷 003 期

页码： 469-477

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)是葡萄溃疡病菌中的优势致病菌。但是由于L.theobromae的遗传转化体系的不成熟和多核完整基因组序列现象的存在，一直未能获得L.theobromae的纯合突变体。L.theobromae纯合突变体的构建为后续L.theobromae的基因功能研究奠定基础。本研究以L.theobromaeLtAGO1基因为敲除对象，通过Double-joint PCR技术将LtAGO1基因上下游同源臂序列构建到PKOV21的敲除载体上；对L.theobromae菌株CSS-01s进行酶解法原生质体制备；同时用聚乙二醇介导的原生质体转化法将敲除载体转入L.theobromae原生质体中；最后通过PCR方法对LtAGO1突变体纯合菌株进行筛选。与传统同源重组方法构建丝状真菌纯合敲除突变体相比，本研究改变了转化子筛选的过程。在前期用潮霉素筛选获得LtAGO1杂合突变体的基础上，通过挑取杂合突变体菌丝尖端重新制备原生质体，将原生质体稀释浓度后进行再一次潮霉素筛选。与常规同源重组方法相比，提高了获得L.theobromae纯合突变体的概率，从无法获得纯合突变体提高到纯合突变体获得率为45%。同时LtAGO1突变体菌株与野生型相比，生长速率加快，致病力显著增强。本研究构建的纯合突变体为研究L.theobromae基因功能奠定基础。